por Yuri Pichugin, PhD, Criobiólogo del personal, Cryonics Institute
"Los propósitos generales de nuestros planes de investigación son (1) mejorar nuestro procedimiento estándar para maximizar la probabilidad de reactivación de nuestros pacientes, dentro de las limitaciones de la viabilidad técnica y financiera; y (2) investigar procedimientos alternativos, ya sean más o menos costosos , para eventualmente ofrecer la mejor gama de opciones posible, dependiendo de las circunstancias de los afiliados o pacientes, los primeros planes incluyen los siguientes.
- Evaluación adicional del procedimiento de CI estándar actual. Esto incluirá el uso del modelo de corte de cerebro de rata y el ensayo de la relación K / Na .
- Modificación de la fase de lavado de sangre y de la solución utilizada. Esto probablemente involucrará la solución RPS-2 (descrita en la literatura existente, pero modificada según mis requisitos y decisiones) a una temperatura de 4ºC.
- Modificación del perfundido, de acuerdo con las conclusiones a las que he llegado, que se seguirán probando, incluido el cambio de tampón y algunos de los electrolitos, y el uso de algunos nuevos aditivos.
- Prueba de lo anterior y de las velocidades de enfriamiento en diferentes etapas del procedimiento, por separado y en combinación. También ensayos y evaluaciones de algunos parámetros de equilibrado y lavado del crioprotector. Ensayos y evaluaciones de diferentes ritmos de recalentamiento.
- Si las cosas salen como espero y algunas de mis nuevas ideas resultan correctas, es posible que pueda crear un nuevo método de criopreservación parecido a la vitrificación, pero más fácil y estable, y que no requiera velocidades de enfriamiento y calentamiento muy rápidas para obtener los mejores resultados. Pero en cualquier caso haremos avances ".
Comencé mi trabajo de investigación desde el 1 de noviembre de 2001. Realicé 215 experimentos en el laboratorio de investigación de CI y 50 experimentos en los otros tres laboratorios, a saber, en la Escuela de Medicina de Harvard, Boston, en el Instituto de Criobiología de Jarkov, Ucrania, y en el Instituto de Neurofisiología de Moscú, Rusia.
Consulte los puntos 1 y 4 de la agenda de investigación del año pasado.
Creé un método para determinar las concentraciones generales de glicerol en el cuerpo y la cabeza de un paciente sin tomar biopsias. Comenzaré a utilizar el método para un primer paciente futuro con IC para obtener más información sobre el procedimiento de perfusión de IC estándar actual para mejorarlo mejor.
El método de suspensión de CI basado en glicerol se investigó cuidadosamente utilizando el modelo de corte de cerebro de rata y el ensayo de relación K / Na. Estudié la supervivencia de cortes de cerebro usando varias concentraciones de glicerol (del 15% al 80%), varias condiciones de exposición al glicerol, varias velocidades de enfriamiento y calentamiento (de muy lento a muy rápido) y varias temperaturas finales de congelación (de -20ºC a -196ºC, Temperatura LN2). Se encontró dependencia de la supervivencia del corte de cerebro de los parámetros de criopreservación. En general, la supervivencia fue máxima (alrededor del 60%) cuando se utilizaron alrededor del 70% de glicerol, velocidades de enfriamiento y calentamiento muy rápidas y la temperatura de enfriamiento final de -130ºC.
Consulte los puntos 2 y 3 de la agenda de investigación del último año.
Propuse las nuevas soluciones de perfusión de vehículo y lavado de sangre basadas en RPS-2 modificado (Solución de preservación renal dos). CI utilizará las soluciones.
También recomendé saturar el cuerpo de un paciente con glicerol hasta un 70% y usar velocidades de enfriamiento más rápidas de 0ºC a −100ºC, pero luego usar velocidades de enfriamiento muy lentas de aproximadamente −120ºC a −196ºC para evitar que el cuerpo se agriete.
Creo que investigué completamente el método de criopreservación con glicerol para cortes de hipocampo de rata. Después de eso, estudié la toxicidad de siete agentes crioprotectores para cortes de cerebro. Estoy nombrando los agentes en orden de aumento de su toxicidad: etilenglicol, glicerol, 1,2 propanodiol, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, monometiléter de etilenglicol y formamida. Los cinco primeros compuestos se utilizaron individualmente para intentar encontrar un método de crioconservación que pudiera ser mejor que el método de glicerol. Solo se puede usar etilenglicol para eso.
Recientemente comencé a realizar experimentos para intentar crear un nuevo método de criopreservación parecido a la vitrificación, pero más fácil y estable , y que no requiera velocidades de enfriamiento y calentamiento muy rápidas para obtener los mejores resultados. Fue el quinto punto de mi plan de investigación.
Antes de presentar mis planes en líneas generales, me gustaría expresar mi paradigma. Mi paradigma científico actual para la criónica es que, muy probablemente, una recuperación completa incluso de los cerebros animales congelados no será posible sin el uso de la nanotecnología. Entonces, intentaré encontrar una mezcla de crioprotectores que sea menos tóxica para el tejido cerebral en concentraciones de hasta el 70% o, tal vez, incluso hasta el 85% para usar velocidades de enfriamiento lentas para los cuerpos humanos para vitrificarlos con una buena práctica. criotecnología. Mi paradigma se basa en mi gran experiencia en mi trabajo experimental con vitrificación de tejido cerebral. El tejido cerebral es el tejido más delicado de todos los tejidos biológicos.
Intentaré encontrar una solución crioprotectora compleja de muchos componentes con una toxicidad mínima y una actividad de vitrificación suficientemente alta. La solución de vitrificación tendrá las siguientes partes constitutivas:
- una mezcla de crioprotectores penetrantes;
- un crioprotector no penetrante para facilitar la vitrificación e inhibir la desvitrificación;
- mejores componentes para vehículos medios que RPS − 2;
- inhibidores posiblemente eficaces del crecimiento del hielo;
- compuestos posiblemente eficaces prepararon tejido cerebral contra tensiones tóxicas y / o por congelación.
Después del uso del modelo de corte de cerebro, probaré los hallazgos usando un modelo de animal muerto fresco. Además, acepto trabajar con cadáveres humanos con el fin de adaptar la futura tecnología de vitrificación de IC para casos reales de pacientes. Por supuesto, si el trabajo será posible.
