por el Dr. Yuri Pichgin
Durante mi cuarto año de investigación en el Cryonics Institute pude realizar 170 experimentos. Mi trabajo de investigación se realizó en las siguientes direcciones:
1. Una mejora de las soluciones de lavado y perfusión.
Se cambió un tampón para la solución de lavado de sangre para tener un concentrado estable de solución de lavado para los directores de funerarias fuera de Michigan.
Se desarrolló la solución de vehículo para la mezcla de vitrificación uno (VM-1). El 70% de VM-1 preparado en esta solución de vehículo no formó ninguna precipitación a 0oC y -20oC durante un año.
Se utilizó un 70% de VM-1 en lugar de un 65% para acelerar la saturación del cerebro con VM y aumentar la probabilidad de vitrificación cerebral.
Se usó la sustancia B en lugar de la sustancia A como un mejor agente para abrir la barrera hematoencefálica (BBB). Se encontró una concentración de Sustancia B que puede abrir completamente la BBB de rata para saturarla con VM-1 sin deshidratación. Sin embargo, se observó un fuerte edema de los tejidos no cerebrales de la cabeza. Eso puede empeorar la saturación del cerebro con VM en algunos casos para pacientes reales, por lo que, por ahora, no recomiendo usar esos compuestos para la perfusión de pacientes con IC. Necesito realizar más experimentos sobre este tema de investigación. Este tema es uno de los temas de investigación prioritarios porque algunos experimentos anteriores demostraron que la deshidratación cerebral fuerte puede disminuir la supervivencia de los tejidos cerebrales en un 30%.
El tejido cerebral de rata que estaba completamente saturado con 65% de VM-1 se puede almacenar a temperatura de hielo seco (-76oC) durante al menos 48 horas sin una disminución de la viabilidad después de la criopreservación. Entonces, el Cryonics Institute (CI) podría transportar a sus pacientes saturados con 65% de VM-1 en hielo seco, por ejemplo, de Reino Unido a EE. UU. Durante 48 horas. Sin embargo, tanto CI como Alcor no tienen métodos confiables para determinar una saturación completa de todo el cerebro humano con VM.
El método de vitrificación IC se aplicó a los dos perros y al paciente reciente IC 69o.
2. El problema de la preservación del cerebro de los pacientes durante el transporte de 12-24 horas desde regiones alejadas de CI.
El procedimiento de perfusión del cerebro de un paciente con soluciones VM es más complicado que el procedimiento con glicerol y, por lo tanto, solo se puede realizar en IC.
2.1 Según los experimentos del Dr. Suda, los tejidos cerebrales se pueden conservar a -20oC durante mucho tiempo, probablemente meses. Sin embargo, ¡ninguno de los otros científicos pudo repetir esos experimentos durante 40 años! Los científicos tampoco repitieron el éxito del Dr. Suda para otros órganos que son más resistentes al almacenamiento en frío y la congelación que el cerebro. Es una nota muy importante porque la preservación de órganos para trasplantes es un negocio multimillonario y creo que muchos científicos intentaron repetir el éxito del Dr. Suda para otros órganos. Mis intentos de repetir los experimentos del Dr. Suda con los tejidos del cerebro de las ratas tampoco tuvieron éxito. Mi mejor resultado fue solo el 20% de supervivencia de los tejidos del cerebro de las ratas. Probablemente, incluso la supervivencia del tejido cerebral puede producir una actividad bioeléctrica similar a la que registró el Dr. Suda.
2.2 El experimento del Dr. Seki. Este experimento es mucho menos conocido para los científicos que el experimento del Dr. Suda porque el Dr. Seki publicó sólo una breve comunicación de su experimento en la revista Cryobiology en diciembre de 1999. ¡Escribió que puede preservar y resucitar corazones aislados de ratas durante 10-26 días! Otros científicos pueden conservar los corazones de las ratas a 4 ° C durante 6 a 8 horas únicamente. No hubo ninguna publicación sobre este tema por el Dr. Seki o por otros científicos desde ese momento.
El Dr. Seki deshidrató los corazones de rata hasta cierto punto y los mantuvo en un medio no acuoso. Traté de usar algunos compuestos para la deshidratación del cerebro de ratas para mejorar el almacenamiento en frío de los cerebros. Sin embargo, no tuve ningún efecto positivo.
3. El estudio de la isquemia fría y caliente de los tejidos cerebrales de rata.
Doy los datos más interesantes de mis experimentos sobre este tema.
La viabilidad del corte de cerebro fue del 85% del control durante 1 hora de isquemia caliente (23 ° C). Fue 72% durante 2 horas de isquemia cálida y solo 50% durante 3 horas de exposición cálida.
La viabilidad del corte de cerebro fue del 80% del control durante 3 horas de isquemia fría (4 ° C) sin isquemia caliente. Fue 74% durante 6 horas de isquemia fría, 59% durante 12 horas, 50% durante 18 horas, 43% durante 24 horas y 0% durante 48 horas de exposición al frío. Los tejidos cerebrales perdieron el 50% de su viabilidad durante 3 horas de isquemia cálida o durante 18 horas de isquemia fría, por lo que la isquemia caliente es 6 veces más dañina para los tejidos cerebrales que la isquemia fría.
Una combinación de isquemia caliente de 10 minutos con 6 horas de isquemia fría dio como resultado una supervivencia del 63% del tejido cerebral. Una combinación de 1 hora de isquemia caliente con 23 horas de isquemia fría dio como resultado una supervivencia del 32% del tejido cerebral.
Otro problema importante es la calidad de la perfusión VM para órganos con isquemia fría de 12 a 24 horas. En este campo encontré un hecho positivo e interesante de que la cabeza del paciente IC 69 con isquemia fría de 12 horas se perfundió mucho mejor que las cabezas de rata con la misma isquemia fría, es decir, las cabezas de rata tenían un edema muy fuerte durante la perfusión VM, pero el paciente la cabeza no tenía edema.
4. Prueba de soluciones de conservación de órganos en los tejidos del cerebro de rata.
El tiempo que los órganos para trasplante pueden conservarse fuera del cuerpo varía, por ejemplo: el corazón - pulmón es de 4 a 5 horas, el corazón es de 6 a 8 horas, el pulmón es de 12 horas, el hígado es de 12 24 horas, y el riñón entre 48 y 72 horas. No hubo información sobre el cerebro porque no se usa para trasplantes. Sin embargo, es un hecho bien conocido que los tejidos cerebrales son los más sensibles a cualquier factor dañino.
Probé las soluciones de preservación de órganos más usadas como Viaspan (o solución de preservación de órganos de la universidad de Wisconsin), RPS-2 y sus modificaciones (Solución de preservación renal), MHP-2 (Manitol - Hidroxietil almidón - Solución de perfusión; M. Darwin y et al, Alcor), Renasol H (Solución renal con almidón de hidroxietilo; Dr. Fahy y col., 21 CM), y Nueva solución de preservación de órganos de la Universidad de Kyoto (Chen F. y col., Japón, 2004). Ninguna de estas soluciones mostró un resultado positivo durante 12 o 24 horas de almacenamiento en frío (4 ° C) de los cerebros de rata que fueron perfundidos con las soluciones en comparación con los cerebros de rata de control no tratados.
5. Probar algunos compuestos en cerebros de ratas para disminuir los efectos negativos de la isquemia fría prolongada.
La edición de junio de 2005 de Scientific American informó sobre la "animación suspendida" de ratones por gas sulfuro de hidrógeno (H2S). Algunos de los crionicistas hicieron la pregunta: ¿Podría el sulfuro de hidrógeno ser un aditivo excelente para las soluciones de conservación de órganos para prevenir la isquemia fría? Aunque Ben Best, como presidente de CI, hace relativamente mucho tiempo antes de esta publicación, me hizo demandas urgentes para mejorar los resultados del almacenamiento en frío del tejido cerebral de 12 a 24 horas. Probé varias concentraciones de H2S (200 mg / L a 2 mg / L) usando cerebros de rata que fueron perfundidos con estas soluciones frías de H2S y se mantuvieron a 2-4oC durante 24 horas. El H2S no mostró ningún efecto positivo en comparación con el control.
También probé trehalosa, N-acetilcistano y deferoxamina para disminuir los efectos negativos de la isquemia fría de 24, 12 y 6 horas en el cerebro de rata. Pero no obtuve resultados positivos.
Leí muchos resúmenes de artículos científicos en los que los autores escribieron que algunos compuestos pueden, por ejemplo, prevenir los efectos negativos de la isquemia cálida de 10 minutos, pero no pueden prevenir la isquemia cálida de 20 minutos. Estudié 3 horas de almacenamiento en frío de cerebros de rata. El H2S y la deferoxamina demostraron un efecto positivo muy pequeño durante 3 horas de almacenamiento en frío de los cerebros de las ratas. Pero necesitamos mejorar los resultados del almacenamiento en frío del tejido cerebral de 12 a 24 horas para transportar a los pacientes con IC de regiones lejanas a IC.
Existe una solución al problema de la isquemia fría y caliente, es decir, los pacientes con potencial de CI pueden trasladarse a las áreas más cercanas a CI para obtener un mejor servicio criónico sin isquemia.
No pude cumplir con algunos de mis importantes planes del año pasado sobre mejoras posteriores del método de vitrificación de CI porque traté de implementar las demandas urgentes del presidente de CI, Ben Best, de llevar a cabo experimentos con el fin de mejorar los resultados de 12 - 24 - 36 horas. almacenamiento en frío del tejido cerebral. En primer lugar, me gustaría intentar elaborar la perfusión VM de la cabeza de un paciente a -25oC y enfriarla a través de los vasos sanguíneos a -40oC o -60oC lo más rápido posible porque la supervivencia del tejido cerebral depende en gran medida del tiempo de exposición y la temperatura. También me gustaría terminar el estudio de la influencia de la deshidratación cerebral en la supervivencia del tejido cerebral para resolver la pregunta sobre el uso de compuestos para abrir la barrera hematoencefálica.
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