Informe de investigación de CI: 2006

 

por Yuri Pichugin, PhD, Criobiólogo del personal, Cryonics Institute

Pude realizar 140 experimentos este año. Los experimentos se dedicaron a varios proyectos de investigación.

1. Continué estudiando la posibilidad de preservar el cerebro de los pacientes durante el transporte de 12 a 24 horas desde regiones que están lejos de CI.

1.1 Terminé el estudio de la isquemia fría y caliente del cerebro de rata. Los resultados fueron publicados en la revista Immortalist (2006, vol. 38, No. 1-2 y 5-6). La conclusión principal es que ninguna de las soluciones y aditivos actuales para la conservación de órganos fueron útiles para el almacenamiento en frío del cerebro a largo plazo. La criónica es muy diferente de la criobiología y la medicina actuales porque se basa en la tecnología perfecta del futuro, pero la criobiología y la medicina imperfectas de hoy solo pueden utilizar recursos naturales y espontáneos de los sistemas biológicos para recuperarlos del daño isquémico.

1.2 Continué estudiando los experimentos del Dr. Suda utilizando cerebros de rata completos y el ensayo de relación K / Na. Los cerebros se perfundieron con soluciones de glicerol (5, 10 y 15% v / v) a 0ºC, se enfriaron lentamente a -20ºC, se mantuvieron a esta temperatura durante 12-24 horas y se lavaron con glicerol. La supervivencia de los tejidos cerebrales de la rata se evaluó mediante el método de corte del hipocampo que usualmente usé. Los tejidos estaban muertos.

1.3 Continué estudiando los experimentos del Dr. Seki usando tejidos cerebrales de rata. El Dr. Seki deshidrató corazones de rata hasta cierto punto y los mantuvo en un medio no acuoso. ¡Él informó brevemente en la revista Cryobiology en 1999 que pudo preservar y resucitar los corazones de rata después de un almacenamiento en frío de 10 a 26 días! Sin embargo, no hubo ninguno de sus artículos o solicitudes de patente sobre este tema para 2000-2006.

Intenté utilizar soluciones de glucosa al 2,5-20% para deshidratar el cerebro de las ratas en varios grados para mejorar el almacenamiento en frío de los cerebros. Sin embargo, esa deshidratación osmótica fue perjudicial para el cerebro de las ratas.

También intenté usar el procedimiento del Dr. Seki para hipocampo de rata. Los hipocampos se almacenaron en líquido inerte con gel de sílice a 2-4ºC durante 24 horas. No hubo ningún efecto positivo.

Se secaron hipocampo de rata con gel de sílice en viales de 20 ml sin líquido inerte a 2-4ºC durante varios tiempos y posterior almacenamiento en frío de los hipocampos durante 24 horas. Los experimentos se realizaron para encontrar la influencia de varios grados de deshidratación de hipocampo de rata por secado sobre la supervivencia de las rodajas. De nuevo no hubo ningún efecto positivo.

Me gustaría publicar los resultados de mis experimentos sobre los sujetos del Dr. Suda y del Dr. Seki en la revista Immortalist.

2. Continué estudiando la calidad de la perfusión de la mezcla de vitrificación (VM) para cerebros de ovejas que tenían isquemia fría de 24 horas.

Es una investigación importante para la IC porque la mayoría de los pacientes con IC tenían isquemia fría a largo plazo (12-24 horas). Mis experimentos demostraron que las cabezas de oveja se perfundieron con éxito con soluciones VM-1 incluso después de su almacenamiento a 2-4ºC durante 24 horas. Los cerebros de las ovejas tenían la vitrificación estable. Es un resultado positivo muy importante para nosotros. Tampoco observé ninguna rotura de los vasos sanguíneos cerebrales.

3. Estudié algunos problemas de la perfusión VM del cuerpo. La saturación del cuerpo humano con cualquier mezcla de vitrificación requiere una gran cantidad de VM para obtener su vitrificación uniforme y estable.

Un problema principal fue la acumulación de una gran cantidad de perfundidos en el tracto digestivo y la cavidad abdominal. Se desconoce la causa exacta de este fenómeno. Lo más probable es que haya una fuga de capilares sanguíneos en esas regiones. Por ahora, es imposible saturar el cuerpo de un paciente con mezclas de vitrificación para obtener su vitrificación uniforme y estable.

En el pasado, CI tenía un poco de hinchazón en el abdomen de los pacientes porque CI usaba una cantidad muy pequeña de soluciones de glicerol para la perfusión corporal. A veces, la IC tenía una hinchazón mayor incluso con la pequeña cantidad de soluciones de glicerol porque esos pacientes con IC tenían cáncer de órganos internos.

Elaboré un método de perfusión del cuerpo de un paciente con soluciones de etilenglicol (EG) para el procedimiento de congelación, pero no para el de vitrificación. Las soluciones de EG concentradas son mucho menos viscosas que las de glicerol. EG penetra mejor en los tejidos que el glicerol.

4. He escrito una solicitud de patente para el método CI de criopreservación de tejidos cerebrales por vitrificación.

Necesitaba realizar varios experimentos adicionales para la aplicación. La mezcla de vitrificación del Cryonics Institute (CI-VM-1) es muy simple y barata. Esta es una de las ventajas más importantes de CI-VM-1 en comparación con otras máquinas virtuales conocidas.

5. Continué estudiando la posibilidad de una mejora del método de vitrificación de IC actual para pacientes potenciales de IC sin isquemia a largo plazo.

La isquemia fría de 12-24 horas redujo la supervivencia de los tejidos cerebrales al 40% del control. Deberíamos proponer a los miembros de CI un método mejorado de vitrificación de CI con la máxima criopreservación posible de los tejidos cerebrales. Para ello, en primer lugar, los pacientes potenciales con IC deben evitar la isquemia a largo plazo.

Creo que los compuestos habituales que se usaron contra la isquemia a corto plazo (es decir, antioxidantes) no pueden mejorar el almacenamiento en frío del cerebro a largo plazo (12-36 horas). Decidí probar algunos compuestos inusuales. Pero tengo una pequeña esperanza de mejorar los resultados de la isquemia a largo plazo.

Uno de los factores dañinos es la deshidratación excesiva del cerebro durante la perfusión VM. La causa de este problema es una permeabilidad muy baja de la barrera hematoencefálica (BBB) ​​para los agentes crioprotectores. Como informé anteriormente, pude saturar los cerebros de ratas y ovejas con VM-1 completamente sin deshidratación usando la Sustancia X para abrir BBB. Sin embargo, necesito continuar con el estudio de la influencia de la deshidratación cerebral en la supervivencia del tejido cerebral para encontrar un procedimiento óptimo para abrir BBB. El procedimiento podría ser material para una nueva solicitud de patente.

La saturación del cerebro humano con un 70% de VM-1 a -20ºC en lugar de 0ºC podría aumentar significativamente la supervivencia del tejido cerebral. El principal problema es una viscosidad muy alta de 70% VM-1 a -20ºC, aunque CI-VM-1 es menos viscoso que otros VM. Necesito realizar más experimentos para intentar solucionar el problema.

También realicé experimentos para estudiar la posibilidad de enfriar más rápidamente la cabeza de un paciente a través de sus vasos sanguíneos usando fluidos inertes después de la saturación de la cabeza con VM. Los modelos para la cabeza humana fueron cabezas de rata y oveja.

Ben Best me propuso usar trehalosa y sacarosa para intentar disminuir las concentraciones de CPA en VM-1. Estaba y ahora estoy en contra de la disminución de las concentraciones de CPA en VM-1 porque esto disminuirá la estabilidad de la vitirificación cerebral y, por lo tanto, puede resultar en la desvitrificación y la formación de hielo. Mis experimentos con trehalosa y sacarosa mostraron la disminución de la estabilidad de la vitirificación del corte cerebral. La cristalización del hielo es un proceso muy poderoso, por lo que no debemos disminuir la concentración de VM-1. Propongo otra forma de aumentar la supervivencia del tejido cerebral, a saber, aumentar la resistencia de los tejidos cerebrales a los efectos tóxicos de VM-1.